論述微孔濾膜在奶牛血清檢測中的應用
導讀:近年來開始應用條件溫和的高效液相色譜法(HPLC)對人體血清、血漿或紅細胞膜脂肪酸濃度進行檢測。HPLC分析奶牛血清中脂肪酸濃度的方法尚未見報道。本文天津津騰實驗設備有限公司建
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發(fā)布日期：2019-12-16 09:18【大 中 小】
近年來開始應用條件溫和的高效液相色譜法(HPLC)對人體血清、血漿或紅細胞膜脂肪酸濃度進行檢測。HPLC分析奶牛血清中脂肪酸濃度的方法尚未見報道。本文天津津騰實驗設備有限公司建立HPLC檢測奶牛血清中脂肪酸濃度的方法，可用于奶牛脂肪酸代謝的相關研究。
1.脂肪酸的衍生化
取樣品小瓶或標準曲線小瓶，加入2－溴苯乙酮丙酮溶液50μL及三乙胺溶液50μL，加入丙酮300μL，蓋緊螺旋蓋，震蕩1min，置95℃干燥箱中反應15min，取出冷卻，加入75μL醋酸丙酮溶液，震蕩1min，置95℃干燥箱中反應5min，取出冷卻，氮氣吹干，0.5mL甲醇復溶，過津騰微孔濾膜，置1.5mL上機小瓶中。
2.色譜條件
色譜柱InertSustainC18(150mm×2.1mm，3μm)。流動相:A液為乙腈，B液為甲醇－水(50∶50)，0～30min乙腈的濃度為52%，30～50min乙腈的濃度從52%升至79%，50～60min乙腈的濃度從79%升至85%，60～65min乙腈的濃度從85%升至100%，保持5min，乙腈的濃度恢復52%，平衡20min。流速:0.45mL/min，檢測波長:244nm，柱溫:50℃。進樣體積:10μL。按內標標準曲線計算血清中脂肪酸含量。
3衍生化方法
脂肪酸沒有紫外吸收，使用紫外檢測器進行檢測需要進行衍生化反應。采用2-溴苯乙酮作為衍生化試劑，操作簡單方便，衍生化后產物穩(wěn)定，在60min內即可完全出峰。乙腈、丙酮和正己烷均是良好的衍生化反應介質，水的存在將會導致反應得率的降低，本試驗天津津騰實驗設備有限公司采用干燥箱加熱的方法進行衍生化反應。
4結論
本研究天津津騰實驗設備有限公司建立的HPLC方法的精密度與回收率滿足質量控制要求，為奶牛血清中脂肪酸的含量檢測提供了方法參考。
